JM109 Chemically Compete Cell

基因型：

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15

簡要說明：

JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質(zhì)量DNA的理想菌株，recA1 和 endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。攜帶 hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內(nèi)源核酸酶系統(tǒng)降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)；High5TM系列JM109感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×109cfu/μg。

操作說明：

1.JM109感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。